کاربرد PCR با استفاده از پرایمرهای 16srRNA و کد کننده لیپاز خارج سلولی جهت تعیین هویت آئروموناس هیدروفیلا و مقایسه آن با آزمون‌های بیوشیمیایی

نوع مقاله: مقاله کامل

نویسندگان

1 دانش آموخته دکتری رشته بهداشت آبزیان، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهیدچمران اهواز

2 استاد گروه علوم درمانگاهی دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید چمران اهواز

3 استاد گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهیدچمران اهوا

4 دانشیار پژوهشی مؤسسه تحقیقات علوم شیلاتی کشو

5 استاد گروه بهداشت و بیماری‌های آبزیان، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران

چکیده

بیماری‌های ماهی یک خطر اصلی در آبزی پروری تجاری محسوب می‌شود که میلیون‌ها دلار ضرر اقتصادی را به این صنعت وارد می‌کنند. در این میان آئروموناس هیدروفیلا به عنوان عامل عفونی غالب در سپتی سمی‌های باکتریایی در سیستم پرورشی آب شیرین خصوصا خانواده کپورماهیان مطرح است. این باکتری عامل سپتی سمی خونریزی دهنده، پوسیدگی باله ودم و سندرم زخم همه‌گیر (EUS) در ماهی‌ها می‌باشد. در این مطالعه تعداد 213 جدایه بدست آمده از 200 قطعه کپور ماهی پرورشی بیمار (126 قطعه کپور معمولی، 39 قطعه فیتوفاگ و 35 قطعه آمور ) در استان خوزستان با آزمون‌های بیوشیمیایی و مولکولی مورد بررسی قرار گرفتند. در تست PCR برای تشخیصAeromonas sp.p از پرایمر 16srRNA مخصوص جنس و جهت تشخیص Aeromonas hydrophila از پرایمر 16srRNA و ژن لیپاز استفاده گردید. نتایج نشان داد که 73% از جدایه‌های Aeromonas sp.p تشخیص داده شده به روش بیوشیمیایی و 52% جدایه‌های مظنون به Aeromonas hydrophila با آزمون PCR تأیید شدند. نتایج تحقیق حاضر نشان داد که روش PCR در مقایسه با روش‌های بیوشیمیایی به عنوان یک روش سریع و دقیق در تشخیص آئروموناس هیدروفیلا مطرح می‌باشد و دارای حساسیت بالایی می‌باشد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Application of PCR mrthod by using of 16srRNA and encoding extracellular lipase primer to Aeromonas hydrophila identification and comparison with biochemical tests

نویسندگان [English]

  • M. Ahangarzadeh 1
  • R. Peyghan, 2
  • M. Ghorbanpour 3
  • M. Sharif Rohani 4
  • M. Soltani 5
1 PhD Graduate of Fish Health, Faculty of VeterinaryMedicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Iran.
2 Professor, Department of Clinical Science, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Iran.
3 Professor, Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Iran.
4 Associated Professor, Iranian Fisheries Research Organization, Tehran, Iran.
5 Professor, Department of Fish Health and Disease, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran. Iran.
چکیده [English]

Fish disease is the major risk factor in commercial aquaculture with millions of dollars lost annually. Among them, Aeromonas hydrophila as dominant infectious agent in bacterial septicemia  in freshwater fish especially Cyprinidae family has been known. A. hydrophila has been associated with tail and fin rot, haemorrhagic septicaemia and epizootic ulcerative syndrome (EUS).In this study 213 isolates were obtained from 200 pieces of patient cultured carp (126 common carp,39 silver carp and 35 grass carp) from Khuzestan province farms with biochemical  and molecular tests  were investigated. 16srRNA gene was used for Aeromonas sp. Detection and 16srRNA lipase genes was used for Aeromonas hydrophila detection. The result shown 73% of Aeromonas sp. and 52% of Aeromonas hydrophila which were detected by biochemical method were conformed by PCR assay. Also result of this study was shown, the PCR assay compared with biochemical methods, is a rapid and sensitive method for Aeromonas hydrophila detection and has a high sensitivity.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Cultured carp
  • Aeromonas hydrophila
  • biochemical method
  • PCR
  • lipase gene

1-AL-Fatlawy, H.N.K. and AL-Ammar, MH. 2013. Molecular study of Aeromonas hydrophila isolated from stool samples in najaf (IRAQ). International Journal of Microbiology Research. 5(1):363-366.
2 -Alishahi, M., Soltani, M., Zargar, A., 2009. Survey on bacterial mortality of grass carp in the Khuzestan province. Iranian veterinary journal. Vol:5, No:1, P:25-34. (In Persian).
3- Austin, B. and Austin, D.A. 2007. Bacterial Fish Pathogens. 4th edition. Chichester, UK: Springer-Praxis.
4 -Buller, N.B.2004. . Bacteria from fish and other aquatic animals: a practical identification manual. CABI publishing . p: 361.
5- Cao, H.P., HeSLu, L. and Hou, L. 2010. Characterization and phylogenetic analysis of the bitrichous pathogenic Aeromonas hydrophila isolated from diseased Siberian sturgen (Acipenser
baerii). Journal of Aquaculture Bamidgeh. 62: 182-189.
6- Cascon, A., Anguita, J., Hernanz, C., Sanchez, M., Fernandez, M. and Naharro, G. 1996. Identification of Aeromonas hydrophila hybridization group 1 by PCR assays. Applied and Enviromental Microbiology. 62 :1167 -1170.
7- Castro-Escarpulli, G.; Figueras, MJ.; Aguilera-Arreola, G.; Soler, L.; Ferna´ ndez-Rendo´ n, E.; Aparicio, GO.; Guarro, J. and Chaco´ n, MR. (2003). Characterisation of Aeromonas spp. isolated from frozen fish intended for human consumption in Mexico. International Journal of Food Microbiology, 84: 41 – 49.
8- Dorsch, M., Ashbolt, N.J., Cox, P.T. and Goodman, A.E. 1994. Rapid identification of Aeromonas species using 16S rDNA targeted oligonucleotide primers: a molecular approach based on screening of environmental isolates. Journal of Applied Bacteriology.77:722–726.
9- Jun J.W., Kim J.H., Gomez D.K., Choresca Jr C.H., Han J.E., Shin S.P. and Park S.C. (2010) African Journal of Microbiology Research, 4(9), 849-855.
10- Khosravi A, Abbasi E, Hashemi A, Eskandari M, Kamaee F. Application of PCR for detection of Vibrio choleraeusing primers targeted against the gene of outer membrane protein ompWand comparison with conventional methods. Iran J Med Microbiol. 2007; 1 (2) :15-20 ( In Persian).
11- Lane D.J., Stackebrandt E., Goodfellow M. (1991) Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, John Wiley & Sons, New York, 115-175.
12- Lee, S., Kim, S., Oh, Y., and Lee, Y. 2000. Characterization of Aeromonas hydrophila isolated from Rainbow Trouts in Korea. The Journal of Microbiology. 38(1):1-7.
13- MaccFadin J.K. (2000) Biochemical Test for Identification of Medical Bacteria, 3rd ed., Awolter Klumer Company Philadelphia Baltimor, New York.
14- Nielsen, M.E., Høi, L., Schmidt, A.S., Qian, D., Shimada, T., Shen, J.Y., and Larsen, J.L. 2001. Is Aeromonas hydrophila the dominant motile aeromonas species that causes disease outbreaks in aquaculture production in the Zhejiang province of china?. Disease of Aquatic Organism. 46(22): 23–29.
15- Pirarat, N., Maita, M., Endo, M. and Katagiri, T. 2007. Lymphoid apoptosis in Edwardsiella tarda septicemia in Tilapia,
Oreochromis niloticus. Fish and Shellfish Immunology. 22: 608-616.
16- Porteen, K., Agarwal, R.K. and Bhilegaonkar, K.N. 2006. PCR Based Detection of Aeromonas from Milk Samples. Journal of food technology. 4(2):111-115.
17- Roberts, RJ (1997) Epizootic ulcerative syndrome (EUS): progress since 1985. In: Flegel TW, MacRae IH (eds) Diseases in Asian aquaculture III. Asian Fisheries Society, Manila, p 125–128.
18- Soltani,M., 1996. Bacterial Diseses of Fish., Iranian Veterinary Organization Pub. P: 231. (In Persian).
19- Swaminathan, T.R., Rathore, G., Abidi, R. and Kapoor, D. 2004. Detection of Aeromonas hydrophila by polymerase chain reaction. Indian Journal Fisheris. 51(2): 251-254.
20- Yogananth, N., Bhakyaraj, R., Chanthuru, A., Anbalagan, T. and Mullai Nila, K. 2009. Detection of Virulence Gene in Aeromonas hydrophila Isolated from Fish Samples Using PCR Technique. Global Journal of Biotechnology & Biochemistry. 4 (1): 51-53.