بررسی حساسیت روش Real-time PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل

ستاری, سمیه; بناءبازی, محمدحسین; ورکوهی, شیدا; طباطبایی, میثم

doi:10.22034/vj.2016.105746

بررسی حساسیت روش Real-time PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل

نوع مقاله : مقاله کامل

نویسندگان

¹ دانشجوی کارشناسی ارشد ژنتیک و اصلاح نژاد دام، دانشکده کشاورزی، دانشگاه رازی کرمانشاه

² عضو هیات علمی، بخش پژوهشهای بیوتکنولوژی، موسسه تحقیقات علوم دامی کشور، کرج

³ عضو هیات علمی، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه رازی کرمانشاه

⁴ عضو هیات علمی، تیم تحقیقاتی نانو سیستم‌ها , پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، کرج

10.22034/vj.2016.105746

چکیده

بیماری نیوکاسل یکی از مخرب‌ترین بیماری‌های ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. باتوجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، هدف از انجام این مطالعه استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. در این مطالعه به منظور تشخیص ویروس نیوکاسل، یک روش Real-time-PCR بهینه سازی گردید. استخراج RNA با استفاده از کیت RNease mini (شرکت کیاژن، آمریکا) و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده استخراج شد. RNA استخراج شده با 109×23/68 رونوشت اولیه به صورت سری رقت‌های μl 100 برای انجام واکنش Real-time PCR تهیه شد. در این آزمایش از سویه B1 واکسن ویروس استفاده شد. آزمایش Real-time-PCR با استفاده از کیت تجاری ساخت شرکت Genekam Biotechnology کشور آلمان انجام شد. حساسیت واکنش Real-time PCR با توجه به سری رقت‌های تهیه شده 34-10×1 رونوشت/میکرولیتر تعیین گردید. با توجه به اینکه سرعت و دقت تشخیص ویروس نیوکاسل در همه‌گیری‌ها، نقش مهمی در کنترل بیماری دارد. استفاده از این روش به عنوان یک روش تشخیصی با حساسیت بالا توصیه می‌گردد.

کلیدواژه‌ها

20.1001.1.24235407.1395.29.1.8.5

عنوان مقاله [English]

Assessment of the sensitivity of Real-time PCR for diagnosis of Newcastle disease virus

نویسندگان [English]

S., Sattari, ¹
MH., Banabazi, ²
Sh., Vakoohi, ³
M. Tabatabaei, ⁴

¹ M.Sc student of animal genetics and breeding, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran.

² Member of scientific board, Department of Biotechnology, Animal Science Research Institute of Iran (ASRI), Karaj, Iran.

³ Member of scientific board, Faculty of Agriculture, Razi University, Kermanshah, Iran.

⁴ Member of scientific board, Nanosystems Research team, Agricultural Biotechnology Research Institute of Iran (ABRII), Karaj, Iran.

چکیده [English]

Newcastle disease is one of the most serious viral diseases in the poultry worldwide. Since the traditional strategies have been not control it well, the aim of this study was to introduce new methods for early and rapid diagnosis of Newcastle. In this study, to detect the virus, a Real-time PCR method was optimized,Viral RNA was extracted from strain B1 using the kit RNease mini (Qiagen, USA), according to the manufacturer's instructions. This sample had 68.23×109copy numbers of viral RNA per each microliter. Then, a serial dilution as 100-fold was prepare from the initial sample. Then, these dilutions were simultaneously applied in reverse transcription and Realtime PCR using commercial kits (Genekam Biotechnology, Germany) according to the manufacture’s instruction. The sensitivity of Real-time PCR reaction was determined based on serial dilutions of 1×10-34 copy number per micro liter. Since, speed and accuracy in diagnosis of contagious of Newcastle disease virus plays an important role to control the disease, so adopting this method is recommended as a diagnostic test with high sensitivity.

کلیدواژه‌ها [English]

Newcastle disease virus (NDV)
Diagnosis
Real-time PCR
sensitivity

مراجع

1- Alexander, D. J. (1991). Newcastle diseas and other paramixovirus infections. In B W Diseases of poultry Iowa State University Press, PP 497-519.
2- Aghakhan, S. M., Abshar, N., Fereidouni, S. R., Marunesi, C., & Khodashenas, M. (1994). Studies on avian viral infectious in Iran. Arch. Razi. Inst,Vol,44, No, 45. PP: 1-5.
3- AL-Garib, S. O., Gielkens, A. L. J., Gruys, E., and Koch, G. (2003). Review of Newcastle disease virus with particular references to immunity and vaccination worlds poultry science journalVol.59. pp: 185-200.
4- Enders, K. O., P K.Cheng, Antia, Y. Y., Hoang, T. L., & L. Wilina, W. (2005). Influenza A H5N1 Detection. The 5th Annual Seminar of National Science Fellowship PP: 1303-1305.
5- Guan, M. K., Cheng, H. L., Liang, Y. K., Wen, T. J., Chulu, J. L., Liao, M. H., et al. (2006). Development of a quantitative Light Cycler real-time RT- PCR for detection of avian reovirus. Journal of Virological Methods. Vol 133. PP: 6-13.
6- Hairul, A. H., Omar, A. R., Mohd Hair-Bejo, and Ideris, A. (2004). [BIO24] Detection of infectious bursal disease virus using SYBR Green 1 based realtime polymerase chain reaction The 4th Annual Seminar of National Science Fellowship, pp: 119-125.
7-Liu, H., Zhao, Y., Zheng, D., Lv, Y., Zhang, W., Xu, T., et al. (2011). Multiplex RT-PCR for rapid detection and differentiation of class I and class II Newcastle disease viruses.Journal of Virological Methods, Vol, 171. PP: 149-155.
8- Michelle, A., Lin, T. L., & Wu, C. C. (2005). Real-time RT-PCR differentiation and quantitation of infectious bursal disease virus strains using dual –labeled fluorescent probes. Journal of virological method.Vol, 127. PP: 8-95.
9- Nidzworski, D., Rabalski, L., & Gramadzka, B. (2010). Detection and differentiation of virulent and avirulent strains of Newcastle disease virus by real-timePCR.Journal of Virological Methods, Vol, 173. PP: 144-149.
10- Pham, H. M., Konnai, S., Usui, T., Chang, K. S., Murata, S., Mase, M., et al. (2005). Rapid detection and differentiation of Newcastle disease virus real-time PCR with melting-curve analysis. Journal of Arch Virological.Vol, 150, No, 12. PP: 2429-2438.
11- Sharawi, S., Al-Habeeb, M. A., and Mohamed, M. H. A. (2013). Detection and characterization of Newcastle disease virus in clinical samples using real time RT-PCR and melting curve analysis based on matrix and fusion genes amplification. Journal of Veterinaryworld.Vol, 10, PP: 239-243.
12- TevfikDorak, M. (2006). Real-time PCR.Taylor & Francis e-Library , New York, NY, USA. pp: 333.
13- Wang, Z., Vreede, F. T., Mitchell, J. O., & Viljoen, G. J. (2001). Rapid detection and differentiation of Newcastle disease virus isolates by a triple one-step RT-PCR. Onderstepoort Journal of Veterinary Research, Vol 68, No, 2. PP: 131-134.