بررسی آلودگی به Toxoplasma gondii در حیوانات مختلف در شهرستان ارومیه به روش PCR و بررسی اختلاف ژنتیکی از طریق RFLP

نویسندگان

1 گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه

2 گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شیراز

3 گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه

4 گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه

5 گروه بهداشت مواد غذایی ، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه

چکیده

آلودگی به تک یاخته انگلی T.gondii در انسان و حیوانات خونگرم در سراسر دنیا وجود دارد. این تک یاخته می تواند در  جنین در حال رشد، موارد نقص سیستم ایمنی مانند مبتلایان به ایدز و افرادی مبتلا به سرطان که تحت درمان شیمی درمانی قرار می گیرند، شیوع یابد. در بین حیوانات اهلی گوسفند و بز به شکل گسترده به T.gondii آلوده می شوند. این انگل موجب سقط جنین در گله های گوسفند و بز و ایجاد خسارات اقتصادی مهم می گردد. در این بررسی از روش واکنش زنجیره ای پلی مراز(PCR) به منظور تشخیص آلودگی به T.gondii با استفاده از ژن B1 استفاده گردید. این ژن در هر شش سویه توکسوپلاسما که تا به حال مشخص شده اند، وجود دارد. نمونه های خون در این بررسی از 372 حیوان شامل(144 نمونه قلاده سگ، 7 قلاده گربه، 126 راس اسب، 50 راس گاو و 45 راس گوسفند) در شهرستان ارومیه اخذ گردید.  در این بررسی از روش Fuents و همکاران 1996 استفاده گردید. بعد از ردیابی محصولات PCR مشخص گردید که 3 نمونه آلوده به T.gondii در بین نمونه های اخذ شده وجود دارد. (2 نمونه اسب و یک نمونه گوسفند). نمونه های مثبت تحت هضم آنزیمی با آنزیم محدود کننده SacI  قرار گرفتند که  الگوی برش بعد از هضم آنزیمی محصول PCR کاملا مشابه بود. این نتایج نشان می دهد که سویه های مشابه از T.gondii می توانند باعث آلودگی در گوسفند و اسب گردند. 

عنوان مقاله [English]

Investigation on Toxoplasma gondii infection in domestic animals in Urmia by PCR and RFLP

نویسندگان [English]

  • M Tavassoli 1
  • M Tabatabaei 2
  • SH Javadi 3
  • B Esmaeilnejad 1
  • A Kazemnia 4
  • K Mardani 5
1 Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University
2 Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University
3 Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Shiraz University
5 KDepartment of Health Science, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University
چکیده [English]

Infection by the protozoan parasite Toxoplasma gondii, is widespread in humans and many other species of warm-blooded animals. It can cause significant morbidity and mortality in the developing fetus and in immunocompromised individuals, including humans with Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS or submitted to cancer chemotherapy. Among livestock, sheep and goat are more widely infected with T. gondii. This parasite is a major cause of abortion, with significant economic losses to sheep and goat breeders. We applied the polymerase chain reaction for detection of the pathogenic protozoan T. gondii based on its B1 gene. The B1 gene is present and conserved in all six T. gondii strains identified to date. For this purpose blood samples were collected from a total of 372 animals (144 dog, 7 cat, 126 horse, 50 cattle and 45 sheep) from Urmia region. In this study, PCR was performed using the previously described primers (Fuentes et al., 1996)(10), which were designed to detect the B1 gene of T. gondii. The targeted B1 gene is highly conserved in all T. gondii strains and is multiple copy genes within the T. gondii genome. The method used for the characterization of T. gondii strains implied digestion with SacI restriction enzyme of the fragments amplified. The results indicated 3 positive samples (2 horse and 1 sheep samples). The 194 bp fragment was generated in all positive samples tested and one RFLP patterns were obtained. The results indicated that the same strain of T. gondii has been infected sheep and horse in the study region. 

1-رزمی، غ و رهبری ص (1373) مقایسه روش آگلوتیناسیون مستقیم اصلاح شده (D.A) با روش های غیرفلورسنت غیرمستقیم (IFAT) و تست رنگی (D.T) در تشخیص توکسوپلاسموز گوسفندان. مجله تحقیقات دامپزشکی ایران، شماره 1، صفحات:17-12. ##

2- شریفیان درچه م، دلیمی اصل ع، کاظمی درمنه ب. (1382) تشخیص زودهنگام توکسوپلاسموز تجربی در خون رت به روش PCR. مجله دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران. شماره 58. صفحات 323-327.##

3-Abdi J., Shojaee S., Mirzaee A. and Keshavarz H. (2008) Seroprevalance of  toxoplasmosis in pregnant women in Ilam proviance, Iran.  Iranian J Parasitol. 3: 34-37.##

4-Bahrieni M., Fasihi Harandi M., Beigzadeh M., Kamyabi H. and Zia-Ali N. (2008) Risk factors analysis associated with seropositivity to Toxoplasma gondii in sheep and goats in southern Iran using modified agglutination test. Iranian J Parasitol. 3: 38-43.##

5- Burg J.L., Grover C.M., Poueletty, P. and Boothroyd J.C. (1989) Direct and sensitive detection of pathogenic protozoan,  Toxoplasma gondii, by polymerase chain reaction. J Clin Microbiol. 27:1787-1792. ##

6- Cristina N., Darde´ M. L., Boudin C., Tavernier., Pestre-Alexandre M. and mbroise-Thomas P. (1995) A DNA fingerprinting method for individual characterization of Toxoplasma gondii strains: combination with isoenzymatic characters for determination of linkage groups. Parasitol. Res. 81:32–37##

7- Darde´ M., Bouteille L. and Pestre-Alexandre M. (1992) Isoenzyme analysis of 35 Toxoplasma gondii isolates and the biological and epidemiological implications. J. Parasitol. 78:786–794.##

8-Desmont G. and Remington J.S. (1980) Direct agglutination test of Toxoplasma infection: Methods for increasing sensitivity and specificity. J. Clin. Microbiol. 11: 562-568. ## 

9-Dubey J.P. and Beattie C.P. (1988) Toxoplasmosis of animal and Man. CRC Press, Boca Raton, FL.##

10-Fuents, E., Rodriguez, M., Domingo, C., Castillo, F., Juncosa,T., Alvar, J. (1996) Urine sample used for congenital toxoplamosis dicgnosis by POR.PP:2368-2371.##

11-Ghorbani M., Edrisian Gh. and Assad N. (2004) Serological survey of toxoplasmosis in northern Iran. Trans Roy Soc Trop Med Hyg. 72:369-371. ##

12- Green  E.C. (1998) Internal medicine and neurology of small animal medicine, infectious diseases of the dogs and cats. 2nd ., pp: 493-503.(W.B. Saunders Company, USA). ##

13- Greg S.J., Vitali G.S., David J.D. and Gwendolyn L.G. (1996) Comparison of cell culture, mouse inoculation and PCR for detection of Toxoplasma gondii. Effects of storge conditions on sensitivity. J. Clin.Microbiol. 34:1572-1575.##

14- Guay J. M., Dubois D. Morency M. J. Gagnon S. Mercier J. and Levesque R. C. (1993) Detection of the pathogenic parasite Toxoplasma gondii by specific amplification of ribosomal sequences using comultiplex polymerase chain reaction. J. Clin. Microbiol. 31:203–207.##

15- Guo Z. G. and Johnson A. M. (1995) Genetic characterization of Toxoplasma gondii strain by random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction. Parasitol.  111:127–132.##

16- Hafid J., Guichard D., Flori P., Bouriet T., Raberin H., Genin C. and TranM.S.R. (2000) Detection of Toxoplasma gondii by polymeras chain reaction in sera of actually infected mice. J. Parasitol. 86:857-859. ##

17- Hashemi-Fesharaki R. (1996) Seroprevalance of  Toxoplasma gondii in cattle, sheep and goats in Iran. Vet Parasitol. 61:1-3.##

18- Howe D.K. and Sibeley L.D. (1995) Toxoplasma gondii Comprise Three Clonal lineage:Corrolation of parasite genotype with humen disease. J. In fect. Dis 172:1561-1566.##

19- Howe D. K., Honore S., Derouin F. and Sibley L. D. (1997)Determination of genotypes of Toxoplasma gondii strains isolated from patients with toxoplasmosis. J. Clin. Microbiol. 35:1411–1414.##

20- Jalayer T. and Alameh T. (1997)  Seroprevalance of congenital toxoplasmosis in neonastal born in Isfehan. Second congress of Parasitology in Tehran(Iran). P.23.## 

21- Jones C. D.,  Okhravi N.,  Adamson P., Tasker S.  and Lightman, S. (2000) Comparison of PCR detection methods for B1, P30, and 18S rDNA Genes of T. gondii in Aqueous Humor, IOVS, 41( 3):635-644.##

22- Johnson A. M. (1997) Speculation on possible life cycle for the clonal lineages in the genus Toxoplasma. Parasitol. Today 13:393–397.##

23- Kasper L.H., Crabb J.H., Pfefferkorn E.R. (1993) Purification of a major membrane protein of Toxoplasma gondii by immunoabsorption with a monoclonal antibody. J Immunol. 130:2407–2412.##

24- McHugh T.D., Ramsay A.R.C., James E.A., Mognie R., Gillespie S.H. (1995) Pitfalls of PCR: Misdiagnosis of cerebral nocardia infection (Letter). Lancet.  346:1436.##

25-Moalaee H.,  Shirzad E., Namazi M.J. (1999) Seroepidemiology of  toxoplasmosis and its eye complication in pregnant women. Sabzavar University Med Sci J. 21-23.##

26- Mondragon R., Howeb D. K., Dubey J. P. and Sibley L. D. (1998) Genotypic analysis of Toxoplasma gondii isolates from pigs. J. Parasitol. 84:639–641.##

27- Nguyen T.D., Kesei M.D.E., Bigaignon G., Hoet P., Pazzaglia G. and Lamments M. (1996) Detection of Toxoplesma gondii tachyzoites and bradyzoites in blood, urine and brains of infected mice. Clininical and Diagnosis Lab Immunol. 3:635-639.##

 28- Owen, M. R., and A. J. Trees. (1999) Genotyping of Toxoplasma gondii associated with abortion in sheep. J. Parasitol. 85:382–384.##

29- Paabo S. and Wilson A.C. (1988) Polymerase chain reaction reveals cloning artefacts. Nature 334: 387-388.##

30- Paabo S. (1989) Ancient DNA: extraction, characterization, molecular cloning, and enzymatic amplification. Proc Natl Acad SciUSA. 86: 1939-1943.##

31-Ramzan N.N., Loftus E., Burgart L.J, et al. (1997) Diagnosis and monitoring of Whipple disease by polymerase chain reaction. Ann Intern Med. 126:520–527.##

32-Romanellii P., Freine, R., Vidotto Mannana E.R., OgawaI., Palma D., Garcia J.L. and Navarro I.T. (2006) Prevalence of Toxoplesma gondii in sheep and dog from Guaropauva forms, Panana States Brazil.  Res Vet Science. 82:202-207.##

33-Sevinc F. (2000a) The seroprevalence of Toxoplasma gendii in goats detected by indirect haemogglotinalion (IHA) and indirect florescents antibody (IFA) tests in the region of konya. Acta Perrosito logica Turnica, 24:57-80.##

34-Sevinc F. (2000b) Seroprevalence of Toxoplasma gondii in stray dogs detected by the Dyetests, indirect fluorescence antibody test and Modified agglutination tests in konya. Acta parasito logica Turnica, 24:61-64.##

35- Sibley L. D. and Boothroyd J. C. (1992) Virulent strains of Toxoplasma gondii comprise a single clonal lineage. Nature 359:82–85.##

36- Suzuki Y., Wong S. Y., Grumet F. C., Fessel J., Montoya J. G., Zolopa A. R., Portmore A., Schumacher-Perdreau F., Schrappe M., Koppen S., Ruf B., Brown B. W. and Remington J. S. (1996) Evidence for genetic regulation of susceptibility to toxoplasmic encephalitis in AIDS patients. J. Infect. Dis. 173:265–268.##

37-Voge M., Makell E., John D. (1992) Medical parasitology. Saunders Company, California, 166pp.##

38-Weiss J.B. (1995) DNA probes and PCR for diognosis of Parsitic infections. Clin. Microbiol. Rev. 8:113-130.##