شناسایی گونه های ویبریو پروبیوتیک علیه ویبریوهای بیماری زا در ماهی قزل آلای رنگین کمان

نویسندگان

1 دانشیار بخش بهداشت و بیماری های آبزیان، دانشکده دامپزشکی دانشگاه شیراز

2 دانش آموخته دانشکده دامپزشکی دانشگاه شیراز

چکیده

تعداد 116 نمونه از ماهی های دریایی و رسوبات ساحلی سواحل خلیج فارس در بوشهر تهیه شد تا با کشت بر روی محیط تی سی بی اس ویبریوهای موجود جداسازی شوند. پس از انجام آزمایش های بیوشیمیایی، 30 گونه ویبریو جدا گردید که در نهایت 7 گونه Vibrioشامل Vibrio anguillarum، V. alginalyticus، V. harveyi، V. vulnificus، V. ordalii، V. Carchariae و V. splendidus شناسایی گردیدند. پاتوژنیستی گونه های جدا شده مورد ارزیابی قرار گرفت و مشخص گردید گونه های وV. vulnificus، V. anguillarum و V. ordaliiاز بیماریزایی شدیدی برای ماهی قزل آلای رنگین کمان برخوردار هستند. خواص آنتاگونیستی این گونه ها بر یکدیگر با روش استفاده از مایع بالایی کشت و همچنین روش آگار دو لایه انجام گرفت و نشان داد تعدادی از این ویبریوها اثر بازدارندگی بر دیگر گونه ها دارند. سه گونه، V. alginalyticus، V. splendidus و V.harveyiبطور جداگانه با غذای ماهی ها به مدت 14 روز به مقدار 109-107 استفاده شد و ماهی ها با ویبریوهای بیماری زا بروش غوطه‌ورسازی مورد چالش قرار گرفتند. در حالیکه میزان بقاء در گروه کنترل 3/53-6/46 درصد بود، ماهی هایی که از پروبیوتیک استفاده نمودند دارای درصد بقاء 6/96-3/93 بودند که به طور معنی داری با گروه کنترل متفاوت بود (05/0 > P). گونه های پروبیوتیکی مورد مطالعه در این تحقیق توانستن باعث تحریک سیستم ایمنی غیراختصاصی ماهی از جمله افزایش فعالیت فاگوسیتوزی و شاخص فاگوسیتوزی ماکروفاژهای کلیه و انفجار تنفسی نوتروفیل های ماهی قزل آلای رنگین کمان شوند. 

عنوان مقاله [English]

Identification of probiotic vibrios against pathogenic vibrios in rainbow trout

نویسندگان [English]

  • M Akhglaghi 1
  • M.J Nouroziasl 2
1 Associate Professor of Veterinary Faculty of Shiraz University
2 Graduated of Veterinary Faculty of Shiraz University
چکیده [English]

A total of 116 marine fishes and sediments were collected from Persian gulf shore near Bushehr in order to isolate vibrio species. After culturing on thiosulphate- cirate- bile salts- sucrose and with biochemical tests, 30 isolates showed vibrio characteristics which were categorized in 7 vibrio species, V. anguillarum, V. alginalyticus, V. harveyi, V. vulnfiicus, V. ordalii, V. carchariae and V. splendidus. In pathogenicity evaluation of vibrio isolates for rainbow trout(Oncorhynchus mykiss, Walbaum), V .vulnificus, V. angillarum and V. ordalii resembled the most pathogens. Antigonistic effects of the isolates were determined using supernatant assay and double-agar layer method. Three isolates, V. alginolyticus, V. splendidus and V. haveyi were separately incorporated into the feed and fed to rainbow trouts for 14 days at doses equivalent to 107-109 cells g-1 of feed and fish were challenged with pathogenic vibrios. Whereas the untreated controls experienced survival rate of 46.6-53.3% when challenged by immersion with V. vulnificus V. anguillarum and V. ordalii, the probiotic treated groups remained healthy with a high survival rate of 93.3-96.6%. The probiotic vibrio species studied in this research reflected stimulation of innate immunity, namely enhanced phagocytic activity and phagocytic index of kidney macrophages  and respiratory burst activity of neutrophils.

1غاضی س. و اخلاقی م. (1376). پادتن های ضد باکتری ویبریو انگوئیلاروم در سرم خون ماهی های قزل آلای رنگین کمان پرورشی. مجله علمی شیلات ایران. سال ششم صفحات 59-47.##

2- Actis LA; Tolmasky ME; Crosa J.H.(1999) Vibriosis. In: Fish diseases and disorders, Vol.3, viral, bacterial and fungal infections(eds P.T.K Woo and D.W Bruno). CAB International, London.##

3- Austin B; Austin DA.(2007) Bacterial fish pathogens, disease of farmed and wild fish, 4rd ed. Springer, Praxis Publishing, UK.##

4- Austin B; Stuckey LF; Roburtson PAW; Effend I; Griffith DRW.(1995) A probiotic strain of Vibrio alginolyticus effective in reducing disease caused by Aeromonas salmonicida, Vibrio anguillarum  and Vibrio ordalii. Journal of Fish Diseases. 18: 93-96.##

5- Brunt J; Austin B.(2005) Use of  a probiotic to control lactococcosis and streptococcosis in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (Walbaum). Journal of Fish Diseases. 28: 693-701.##

6- Buller NB.(2004) Bacteria from fish and other aquatic animals, a practical identification manual. CABI publishing, UK.##

7- Depazo CP; Lemos ML; Lodeiros C; Bolinches J; Barja JL; Toranzo AE.(1988) Inhibitory activities of antibiotic- producing marine bacteria against fish pathogens. Journal of Applied Bacteriology. 65: 97-101.##

8- Gatesoupe FJ.(1999) The use of probiotics in aquaculture. Aquaculture. 180: 147-165.##

9- Garrity GM; Holt JG.(2001) The road map to the manual. In; Brgey's manual of systematic bacteriology. 2nd ed, Vol. 1 (eds D.R Boone and R.W Castenbolz). Springer, New York.##

10- Gibson LF.(1999) Bacteriocin activity and probiotic activity of Aeromonas. Journal of Applied Microbiology, Symposium Supplement. 85: 243-248.##

11-Irianto A; Austin B.(2002) Use of probiotics to contral furnculosis in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss (walbaum). Journal of Fish Diseases. 25: 333-342.##

12- Kennedy SB; Tucker JW; Thoresen M; Sennett DG.(1998)Current methodology for the use of probiotic bacteria in the culture of marine fish larvae. Aquaculture 98, World  Aquaculture Society. Baton Rouge, p. 286.##

13- Kim DH;Austin B.(2006) Innate immune responses in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss,Walbaum) induced by probiotics. Fish & Shellfish Immunology.  21: 513-524.##

14- Miranda CD; Zemelman R.(2002) Bacterial resistance to oxytetracycline in Chilean farming. Aquaculture. 212: 31-47.##

15- Nikoskelaineu S; Ouwehand AC; Bulund G; Salminen S; Eas-Matti L.(2003) Immune enhancement of probiotic bacteria (Lactobacillus rhamnosus). Fish and Shellfish Immunology. 15: 443-452.##

16- Olsson JC; Westerdhl A; Conway PL;  Kjelleberg S.(1992)Intestinal colonization potential of turbot (Scophthalmus maximus) of dab (Limanda limanda) associated bacteria with inhibitory effects against Vibrio anguillarum. Applied and Environmental Microbiology. 58: 551-558.##

17- Qstergaard A; Embarek PKB; Wedell-Neergaard C; Huss HH; Gram L.(1998) Characterization of anti-Listerial lactic acid bacteria from Thai fermented fish products. Food Microbiology. 15: 223-233.##

18- Quinn PJ; Carter ME; Markey B; Carter GR.(1994) Clinical Veterinary Microbiology. Wolf Publication, London.##

19- Riquelme C; Hayashida G; Araya R; Uchida A; Satomi M; Ishida Y.(1996) Isolation of native bacterial strain the scallop Argopecten purpuratus with inhibitory effects against pathogenic vibrios. Journal of Shellfish Research. 15 : 369-374. ##

20- Sakai M; Kobyashi M; Yoshida T.(1995) Activation of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, phagocytic cells by administration of bovine lactoferrin. Comparative Biochemistry and Physiology. 110B: 755-759.##

21- Stasiack AS; Bauman CP.(1996) Neutrophil activity as a potent indicator for concomitant analysis. Fish and Shellfish Immunology. 6: 537-542.##

22- Sugita H; Matsuo N; Horose Y; Iwaa M; Deguchi Y.(1997) Vibrio sp.. StrainNM 10, isolated from the intestine of a Japanese coastal fish, has an inhibitory effect against Pasteurella piscicida. Applied of Environmental Microbiology. 63: 4986-4989.##

23- Sugita H; Matsuo N; Shibuya K; Deguchi, Y.(1996) Antibacterial substance-producing ability of the intestinal bacteria isolated from coastal animals. Journal of Marine Biotechnology. 4: 220-225.##

24- Tukmechi A; Morshedi A; Delirezh N.(2007) Changes in intestinal microflora and humoral mmune response following probiotic administration in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Journal of Animal and Veterinary Advances. 6: 1183-1189.##

25- Vander Waaij D; Nord CE.(2000) Development and persistence of multi-resistance to antibiotics in bacteria: an analysis and a new approach to this urgent problem. International Journal of Antimicrobial Agents. 16: 191-197.##

26- Vine NG; Leukes WD; Kaiser H; Daya S; Baxter J; Hecht T.(2004) Competition for attachment of aquaculture candidate probiotic and pathogenic bacteria on fish intestinal mucus. Journal of Fish Diseases. 27: 319-326.##

27- West PA; Colwell R. R.(1984) Identification of vibrionacea. An overview. In: Vibrios in the environment (ed, Colwell). John Wiley Publication, NewYork.##